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ਖ਼ᕚజኬ
蟲卵染色處理步驟
實驗室繼代飼養之蟲蛹來自農業試驗所嘉義分所d羽化後之成蟲飼養於塑膠養
蟲籠內
32.5*32.5*32.5CM
d供給人工飼料與水d人工飼料以台糖精緻細砂j酵
母抽出物j蛋白
腖
以
3
j
1
j
1
之比例混合f以市售之番石榴果汁置於採卵管中吸引
成蟲產卵d採卵管以透明
50ml
離心管製作d管壁以蟲針穿刺適量孔洞d再以滴管吸
取
5ml
番石榴果汁於離心管瓶蓋上d將離心管倒置放於養蟲籠內誘集產卵d採卵時
以逆滲透水清洗管壁之蟲卵收集而成f
將東方果實蠅蟲卵分成活的蟲卵及經過熱處理死亡蟲卵二組d並將卵置於細胞
篩網以便進行後續染色步驟f先以
2%
次氯酸鈉浸泡處理蟲卵
1
{
2
分鐘去除卵殼d
再以逆滲透水沖洗d此步驟加入
2%
硫代硫酸鈉
Sodium thiosulphate
d有助於
去除殘餘的氯f再以緩衝液
PBS Buffer
1:30
稀釋
EPS
界面活性劑d處理已去除
卵殼的蟲卵浸泡
1
分鐘d以逆滲透水沖洗乾淨後d即可以
0.05%
細胞染劑染色
10
分
鐘d視蟲卵著色與否來判別蟲卵活性f經去除卵殼及蠟層之蟲卵d可容許分子量
400
以下的染劑如
Methylene Red
分子量
269.3 g/mole
e
Toluidine Blue
分子量
270.37 g/mole
和
Meldola's blue
分子量
378.92 g/mole
通過卵黃膜d藉由呈
色反應來判別活性圖
3~5
f死亡之蟲卵卵黃膜已產生生理生化變性而失去活性d
染劑可穿透進而將死亡的卵細胞染色d而活蟲卵的卵黃膜仍保持完整d染劑無法進入
而抗染不呈色圖
6
f
■
圖
3
經過熱處理死亡之蟲卵被
0.05% Methylene
Red
染色而呈現橘色
■
圖
4
經過熱處理死亡之蟲卵被
0.05% Toluidine
Blue
染色而呈現藍色
■
圖
5
經過熱處理死亡之蟲卵被
0.05% Meldola's
blue
染色而呈現藍紫色
■
圖
6
活蟲卵的卵黃膜仍保持完整d染劑無法進入
而抗染不呈色
結語
蟲卵死活之判定為檢疫把關之基礎d本研究在於尋找適用於果實蠅蟲卵染色分
析之細胞染劑及最適染色處理條件f整體染色處理過程僅需
20
分鐘即可判定活性d
可縮短確認蟲卵自然孵化之等待時間d期能解決等待蟲卵孵化造成檢疫通關之難題f
但蟲卵染色是否能均勻呈色d除與染劑分子量大小有關d亦受卵齡影響d因卵殼硬度
與卵齡呈正相關d隨卵齡愈長d去除卵殼及蠟層之處理步驟亦需延長d因此相關染色
呈色反應之穩定度仍需再研究調整f
圖
3
圖
5
圖
4
圖
6
