農委會防檢局新竹分局植物檢疫課 劉逸琪、許永斌

農委會農業試驗所應用動物組 張淑貞、陳文華

成果摘要

根蟎屬根蟎為世界性重要害蟲，但其個體細小，種類間外部型態極為相似，分類特徵又不一定或不明顯，肉眼不易區分，臨場檢疫多發現若蟎， 在檢防疫鑑定上面臨極大的困難。本研究之目的在嘗試應用分子生物技術，分析核糖體 DNA （ ribosomal DNA ）之內轉錄區隔間序列（ internal transcribed spacer 1 region sequence ，簡稱 ITS1 region ）並建立分子診斷標誌，以解決根蟎屬害蟎鑑定所面臨的難題。首先以 Chelex 100 快速萃取單隻害 蟎 基因體 DNA ，並以 White 等人（ 1990 ）報告中所使用之普遍性引子對增幅包括刺足根蟎（ Rhizoglyphus echinopus (Fumouze ＆ Robin) ）、長毛根蟎（ R. setosus (Manson) ）、羅賓根蟎（ R. robini (Claparede) ）、長肛毛根蟎（ R. longispinosus ）及竹田根蟎（ R. tsutiensis (Claparede) ）等五種根 蟎 屬害蟎之 ITS1 區隔間序列，經 DNASTAR 分析軟體進行核甘酸序列比對分析，設計出可清楚區別上述五種根蟎屬害蟎之專一性引子，測試結果顯示確實可依不同根蟎屬害蟎 產生專一性 DNA 片段快速區別。結合此至種專一性 DNA 片段之分子梯度分析（ molecular ladder assay ）及以聚合酵素鏈鎖反應增幅內轉錄區隔間序列 - 限制酵素圖譜（ polymerase chain reaction- Restriction fragment length polymorphism in ITS1 region sequence ，簡稱 PCR- RFLP ）進行根蟎屬害蟎分子鑑定，應能達到更快速且準確地鑑定根蟎屬害蟎之目的。